NK细胞培养中细胞密度的控制
发布时间：2022-03-17 13:41:44 浏览量：2684
一. 培养前PBMC投入密度
健康成年人的外周血PBMC量约为100万-200万个/ml，平均数量为150万个/ml。而NK细胞培养活化阶段，初始体积（培养基+因子+血浆）为60ml左右，起始密度为100-300万/ml，所需细胞总量为6000万-1.8亿，抽血量控制在50ml-70ml左右是合适的（根据个体差异）。
二. NK细胞培养过程中细胞密度的控制
1. NK细胞培养的密度下限为100万个/ml，上限为300万个/ml。
2. 密度低于100万个/ml，细胞间隔距离远，细胞效应消失，活化效率低，增殖速度慢；密度高于250万个/ml，细胞间隔近，生长空间小，营养成分供应不足，也会影响增殖速度。
3. 最佳补液时机：当细胞密度增殖到150万-200万个/ml之间，根据公式当前细胞总量（单位个） ÷ 100万个 - 现有体积（ml） = 本次需补加培养基体积（ml），将补液后的细胞密度控制在100万个/ml。一般每隔48小时计数补液一次，直到培养基完全用光。
意义：每次补液后，维持细胞密度在100万个/ml，有利于细胞增殖效率最大化。在24-48小时之间，细胞数量翻倍增殖。
4. 如果计数后发现当前细胞密度达不到100万个/ml，建议48小时后再计数，细胞状态不好或有凋亡现象，立即补加2-5ml灭活自体血浆。
5. 细胞培养环境：99.99%纯度的二氧化碳：5% 温度：37℃。
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